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Delineamento de anticorpos multipeptídeos específicos para toxinas de venenos de serpentes baseado nas sequências de aminoácidos recuperadas das “Complementarity-Determining Regions” (CDRs) de antivenenos”.

 

Vilmar Dias - Delineamento de Anticorpos Multipeptideos

 

Wilmar Dias da Silva

Resumo: Anticorpos anti-toxinas representativas dos venenos de serpentes C. d. terrificus e B. arietans serão preparadosem camundongos das linhagens BALB/c e C57Bl/6. Os esquemas de imunização serão orientados visando produção de anticorpos com diferentes afinidades de interação com os respectivos epitopos antigênicos. Imunglobulinas IgG anti-toxinas serão isoladas por cromatografias sucessivas de afinidade e imunoafinidade. Fragmentos Fab (50kDa) e scFab (28kDa) serão preparados, as regiões VL (L1, L2 e L3) e VH (H1, H2 e H3) correspondentes aos CDRs serão isoladas e as sequências de aminoácidos serão determinadas. Os padrões de sequências de aminoácidos correspondentes às IgGs antitoxinas de baixa e alta afinidade serão determinados. Os epitopos reconhecíveis por peptídeos antitoxinas serão identificados por bloqueio específico de suas atividades biológicas e/ou enzimáticas. Populações de linfócitos esplênicos como fontes de DNA/mRNA serão coletadas de grupos de camundongos imunizados em paralelo. mRNAs codificadores de CDRs serão identificados com “primers” específicos, amplificados por RT-PCR e usados para construção de cDNA. Essas sequências serão submetidas ao “InMunoGnetics (IMGT´S) anotated data-base of Acs cocrystalized structures regsitered on “protein Data Bank (IMGT/3Dstructure-DB)”. Plataformas de sequências obtidas experimentalmente/computacionalmente serão ajustadas e usadas para construir multipeptídeos antitoxinas. A eficiência neutralizante será avaliada in vitro e in vivo.

Os resultados obtidos serão SUBMETIDOS para publicação em revistas especializadas (Protein Eng; Proteins) e/ou registrados em patentes pela “Britânia – marcas e patentes).

PALAVRAS-CHAVE: Anticorpos; epitopos; toxinas; fragmentos IgG; multi-peptídeos; interações moleculares.

Equipe

Wilmar Dias da Silva, Pesquisador Principal
Fábio Carlos Magnoli, Pesquisador Associado
Maria Núbia Alencar Couto, Mestranda
Fernanda C.V. PortaroPesquisadora Associada
Roberto Tadashi Kodama, Doutorando
Daniela Cajado Carvalho, Doutoranda
Alexandre Kazuo Kuniyoshi, Doutorando
Bruno Duzzi, Doutorando
Cristiane Castilho Fernandes da Silva, Mestranda

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